Proteine pericolose: identificazione e analisi di proteine allergeniche da alimenti vegetali tramite Dot-Blotting e SDS-PAGE

Tutti i test verranno eseguiti in singolo cieco, vale a dire che gli studenti non sapranno l’origine dei diversi campioni, e dovranno dedurla dai risultati delle analisi. I campioni di pasta o biscotti verranno triturati usando un mortaio, quindi si procederà all’estrazione del loro contenuto proteico totale. Una piccola parte dell’estratto proteico totale verrà usata per verificare la presenza di glutine in ciascun campione, come forma di controllo qualità per la dichiarazione gluten-free, usando la tecnica del Dot-Blotting. Il Dot-Blotting è una procedura di laboratorio semplice e rapida per rilevare la presenza di una specifica proteina all’interno di un campione eterogeneo, che si basa sull’immobilizzazione della proteina su membrana di nitrocellulosa, e sul suo successivo riconoscimento da parte di un anticorpo. La presenza del legame proteina-anticorpo verrà rilevato tramite reazione colorimetrica. Parallelamente, il resto degli estratti proteici verrà disciolto in Laemmli buffer e caricato in un gel di poliacrilammide, per separare le proteine in base al peso molecolare usando la SDS-PAGE. Questa tecnica è un altro caposaldo della biologia molecolare, e consente di distinguere proteine diverse in uno stesso estratto, sulla base della loro dimensione. Colorando il gel con blu di Coomassie, sarà possibile visualizzare le bande che le proteine hanno formato separandosi lungo il gel. In base allo spessore delle bande e al loro numero, sarà possibile classificare i campioni in base alla quantità e alla varietà delle proteine che contengono. A questo punto, verrà rivelata agli studenti l’identità di ciascun campione.